β- 액틴, GAPDH, HPRT1 및 RPLP1을 포함한 하우스 키핑 유전자 및 단백질 은 실험 전반에 걸쳐 동일한 수준에서 구성 적으로 발현되는 것으로 생각되기 때문에 웨스턴 블롯에서 내부 대조군으로 자주 사용됩니다. 그러나 최근 연구에 따르면 하우스 키핑 단백질 (HKP)의 발현 형태는 별개의 세포 유형과 생물학적 조건에 따라 달라질 수 있습니다. 결론적으로, 과학 출판사 및 자금 지원 기관은 이제 결과의 재현성과 정확성을 보장하기 위해 각 실험에 대해 정규화 제어를 사전에 검증해야합니다.
형광 항체
웨스턴 블롯에서 단백질을 이미지화하기 위해 형광 항체를 사용하는 경우 정규화를 수행하려면 사용자가 정량의 상한 및 하한을 정의하고 각 항원에 대한 신호 강도와 샘플 질량 사이의 선형 관계를 특성화해야합니다. 객관적인 단백질과 정규화 제어는 모두 동적 검출 범위 내에서 형광을 발해야합니다. 많은 HKP가 높은 수준으로 발현되며 고도로 발현되는 목적 단백질과 함께 사용하는 것이 선호됩니다. 낮은 발현 단백질은 동일한 얼룩에서 발견하기가 어렵습니다.
형광 항체는 시판되고 있으며 결과의 일관성을 보장하기 위해 완전히 특성화 된 항체를 권장합니다.
이미지 289A | Western blot 화학 발광 검출 | Bensaccount / Attribution 3.0 Unported | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Western_blot_chemiluminescent_detection.png) from Wikimedia Commons | URL: Wikimedia Commons.
저자 : Yavor Mendel
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